禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)是-种无包膜双链DNA病毒,属于腺病毒科禽腺病毒属。根据血清型分子结构和血清交叉中和实验结果可以将FAdV细分为12个血清型,不同的血清型在造成发病和死亡/或者引发呼吸道疾病的能力也有所不同。其中FAdV-4是我国鸡群流行的优势毒株血清型之一,也是导致心包积水-肝炎综合征的主要病原体,主要感染3~6周龄肉鸡,具有很强的传染性和致病性。近年来,FAdV-4 在我国山东、河北、河南、江苏、陕西等地大面积流行,给家禽养殖业造成了巨大的经济损失。
目前针对FAdV-4的诊断检测方法包括病毒分离与鉴定、基于PCR的 核酸检测方法、酶联免疫吸附法(ELISA)和琼脂凝胶扩散实验(AGP)等。这些方法均存在一定的局限性:病毒分离与鉴定的准确度较高,但是它需要对病毒进行培养,并通过透射电镜对病毒形态的进行观察,耗时较长;基于PCR的核酸检测方法的敏感性较高,但操作较为繁琐(需要抽提病毒核酸、PCR扩增、电泳检测等步骤),需要紧密的实验室设备和专 业的操作人员,检测成本及对专门的仪器设备的依赖性很高;ELISA和AGP这类血清学诊断方法虽然不依赖于昂贵的仪器,但是存在敏感性较低、耗时较长,不易标准化、不能快速、及时地对FAdV-4的检测结果的阴/阳作出判断等缺点。
电化学免疫传感器是将电化学分析方法和免疫分析方法相结合的一种新型检测技术。近年来,电化学免疫传感器已经成功应用于国防安全、环境分析、食品分析和临床医学等领域。电化学免疫传感器的原理是:通过物理化学方法,将能够识别目标物的敏感元件固定到工作电极表面上,再与待检的目标物特异性结合,生成的生物化学能被转换成电能,并以电信号形式输出,通过对电信号的检测分析,实现对目标物的检测。电化学免疫传感器是化学、材料科学及生命科学等多学科交叉的产物,它具有检测快速、操作简单、灵敏度高、特异性好、成本低、仪器可微型化等优点。
本申请公开了一种由多壁碳纳米管制备的多壁碳纳米管-壳聚糖-铂(MWCNT-Chi-PtNP)纳米复合物,并用于FAdV-4的电化学免疫传感器的检测。用MWCNT-Chi-PtNP修饰金电极,再吸附抗FAdV-4单克隆抗体,构建FAdV-4的电化学免疫传感器,优化待测样品的孵育时间及电解液的pH值,待测样品孵育仅30分钟即可进行电化学阻抗谱EIS扫描检测,最终对FAdV-4病毒含量的最低检出限为101.89EID50/mL、 检测范围为101.46EIDEID50/mL~ 105.46EID50/mL,检测灵敏度提高了37倍,特异性更强,且制备工艺的批间和批内重复性均良好。