圆圈病毒禽源1型(Gyrovirus galga1,GyVg1)和圆圈病毒人源1型(Gyrovirus homsa1,GyH1)是继鸡贫血病毒(Chicken anemia virus,CAV)后新发现的第二位和第三位环形病毒,属于指环病毒科(Anelloviridae)环病毒属(Gyrovirus)成员。GyVg1和GyH1主要与其他病原体混合感染鸡群,感染鸡表现为出血、水肿、腺胃糜烂、头部肿胀等症状,可导致鸡高发病率与高死亡率;已经报道的其他感染GyVg1的动物包括人类、野生鸟类、雪貂、犬、家猫、蛇和蜱虫,感染GyH1的动物包括人类、野生鸟类、雪貂和家猫,两者感染的宿主范围相似,被感染者均表现不同程度腹泻症状,提示这两种新型圆圈病毒有跨宿主传播风险。
目前针对GyVg1的检测仍然依赖于分子检测技术,包括常规PCR、荧光定量PCR、微滴式数字PCR、实时荧光重组酶辅助等温扩增(RAA)等;在GyH1的临床检测以及流行病学研究中,免疫学诊断方法包括间接ELISA方法,双抗体夹心ELISA方法和胶体金免疫层析试纸条检测方法,分子检测技术有常规PCR检测、实时荧光定量PCR检测、可视化LAMP检测和实时荧光RAA检测等。这些方法都能特异性检测出特定病原体,但每次仅能检测其中一种圆圈病毒,增加了病原检测的时间和工作量。基于GyVg1和GyH1的病原学和临床表现相似性,本发明拟建立一个可用于同时检测两种病毒的二重检测体系。
本发明公开了用于同时检测圆圈病毒禽源1型和圆圈病毒人源1型的检测体系及其应用,涉及生物检测技术领域。该检测体系包括GyVg1的RAA扩增引物对、GyH1的RAA扩增引物对、12-crRNA-3、13-crRNA-2、ssDNA探针、ssRNA探针、LbCas12a核酸酶、LbuCas13a核酸酶和T7转录酶。本发明基于GyVg1和GyH1保守基因,分别设计特异性crRNA和RAA引物,通过将RAA扩增技术与CRISPRCas荧光检测系统结合,建立了用于同时检测GyVg1和GyH1的检测体系。该检测体系可同时检测两种不同亚型的圆圈病毒,提高了检测效率,为病毒感染动态研究提供了新的技术手段。